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                  如何選擇正確的二抗?

                  更新時間:2024-03-21      點擊次數:106

                  二級抗體用于幾種免疫分析中,以檢測一級抗體的存在。這些抗體與酶、生物分子或熒光染料結合,以檢測一抗。與一級抗體不同,二級抗體是針對一級抗體的種類和同種型產生的,通過在多個位置與一級抗體結合來檢測一級抗體。

                  為了成功選擇您的第二抗體,您應該考慮以下因素:

                  確保匹配良好–宿主物種是產生第二抗體的動物,應始終與第一抗體的宿主不同。例如,如果您使用在兔子中產生的一抗,您將需要在不同于兔子的物種(如山羊、驢或小鼠)中產生的抗兔二抗(圖1)。

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                  完整抗體還是片段?–實際上,真正的問題應該是“您的主要抗體是單克隆抗體還是多克隆抗體?"這兩個問題的答案通常取決于應用程序。單克隆一抗包含單一同種型的免疫球蛋白。因此,使用特異性識別同種型的二抗至關重要。此外,單克隆動物通常飼養在小鼠、兔和大鼠中。因此,如果主要單克隆抗體是小鼠IgG1,您將需要抗小鼠IgG或特異性較低的F(ab)片段抗小鼠IgG??贵w片段適合用于免疫組織化學和免疫熒光,因為它們的體積較小,能夠穿透組織。然而,較小的大小可能會限制與片段結合的染料或酶的選擇,導致二抗可能不如全抗體敏感。

                  多克隆一抗包含幾種同種型免疫球蛋白g的混合物。因此,為了最大限度地檢測目標,最好使用能識別所有同種型的二抗。多克隆抗體通常以全抗體形式(重鏈+輕鏈)飼養在兔、山羊、綿羊和驢中,因此第二宿主物種必須用來自不同物種的IgG池進行免疫,從而使純化的第二抗體能夠識別所有形式。例如,如果初級多克隆抗體是山羊IgG,您將需要抗山羊IgG(H+L)。然而,全抗體可能導致高背景和較低的特異性,因為所有免疫球蛋白共享輕鏈,這增加了交叉反應性(圖2)。

                  根據您的應用選擇共軛物-這取決于第二抗體如何檢測信號。例如,免疫組織化學、ELISA和蛋白質印跡應用使用基于生物素標記的比色和化學發光檢測來放大信號和提高靈敏度,以及與辣根過氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶(AP)作用的酶反應。然而,對于免疫標記、熒光顯微鏡和流式細胞儀實驗,使用熒光染料如Alexa Fluor檢測信號,這些熒光染料直接與抗體結合以放大信號和靈敏度。

                  親和純化抗體與交叉吸附抗體–該步驟用于提高抗體的特異性,并可在親和純化和交叉吸附中進行區分。大多數二抗通過親和層析純化,產生高親和力抗體。這種抗體通常在IHC使用,因為它們產生最小的非特異性結合,也用于蛋白質印跡檢測低豐度蛋白。交叉吸附的第二抗體通常經過額外的純化步驟,以過濾掉與非靶免疫球蛋白種類結合的成員。這一步驟增加了它們的特異性并減少了非特異性背景。這些抗體是為免疫組織化學等特殊應用而設計的。


                  總之,二級抗體的選擇取決于手頭的應用和目標豐度所需的靈敏度和純化水平以及非特異性結合的風險。


                  BMA是BMA Biomedicals的縮寫,是一家位于瑞士北部巴塞爾地區的小型生物技術公司。

                  由一群免疫學家、生物化學家和生物學家于1989年創建,其主要活動領域是抗體的開發、生產和營銷。2005年,BMA被Chemoforma Inc .收購,chemo forma Inc .是一家長期活躍于免疫支持飼料添加劑生產領域的商業合作伙伴。2013年,Chemoforma Inc .收購了總部位于加州的半島實驗室國際公司,該公司專門從事抗肽抗體和放射免疫分析。

                  BMA的主要專長在于抗體在免疫組織化學和酶免疫分析(ELISAs)中的應用。生產已適應無胎牛血清的培養基。這不僅是對可持續發展和動物福利的重要貢獻,而且產品不含污染性??贵w。它們通常僅供體外研究使用,但支持將適當的產品授權給診斷領域的公司。

                  BMA經營自己的設施,擁有先進的分析和生產基礎設施。我們的技術訣竅在于單克隆和多克隆抗體的生產和衍生,以及它們在免疫學技術中的應用。BMA還許可外部組織的產品。這些產品可能處于早期開發階段,最終將由公司進行生產更新。

                  BMA的產品范圍以客戶為導向,包括許多專注于有限或專業應用的產品。有些是由BMA自己生產的,有些是有大量出版記錄的常規產品。

                  BMA的產品重點包括以下領域

                  • 炎癥和傳染病
                  • 止血
                  • 腫瘤相關疾病
                  • 獸醫試劑,特別是抗豬組織的抗體


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