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                  細胞庫實踐綜合指南

                  更新時間:2024-04-09      點擊次數:61

                  細胞培養的有效管理對于保持其在研究和治療應用中的完整性至關重要。細胞系的連續或長期培養會導致各種并發癥,例如:

                  • 微生物污染:

                    開放培養容易受到各種微生物感染,這些微生物會改變細胞行為和生存能力。
                  • 特征變化:

                    關鍵的細胞特征,如抗原表達或抗體產生,可能會隨著時間的推移而丟失。
                  • 遺傳變異:

                    基因組不穩定性可能發生在以核型不穩定而聞名的細胞系中,從而導致不可靠的實驗結果。
                  • 壽命限制:

                    某些類型的細胞在進入衰老和停止增殖之前分裂次數有限。
                  • 交叉污染風險:

                    長期培養增加了一個細胞系污染另一個細胞系的風險,從而導致錯誤的數據。
                  • 資源密集度:

                    長期培養需要更多的消耗品和勞動力,大大增加了成本。

                  細胞庫的戰略方法

                  細胞庫系統是減輕上述風險的戰略方法。推薦的系統是主小區銀行系統,包括以下步驟:

                  1. 初始隔離:

                    新獲得的細胞培養物應在嚴格的檢疫條件下隔離和處理,以防止實驗室污染。
                  2. Token Stock Establishment:

                    初始培養擴增后,應冷凍保存少量安瓿瓶(3-5瓶)作為應急備用的象征性儲備。
                  3. 主細胞庫形成:

                    從代幣儲備安瓿瓶擴大培養物,以建立由大量安瓿瓶組成的主細胞庫(10-20個或更多,根據計劃使用情況而定)。
                  4. 嚴格的質量控制:

                    主細胞庫的一個子集經歷了全面的質量控制測試,其中包括評估細胞活力,確認不存在微生物污染物,并可能進行病毒和真實性測試。
                  5. 工作細胞庫的開發:

                    然后使用主細胞庫的一部分創建工作細胞庫,這是積極研究和應用的主要來源。

                  詳細的質量控制協議

                  質量控制是維護細胞庫的關鍵部分。它包括:

                  • 生存力和計數測試:

                    確保細胞存活且數量充足。
                  • 微生物篩選:

                    定期檢測細菌、真菌和支原體以防止細胞培養受損。
                  • 認證程序:

                    通過DNA分析等方法確認細胞系的身份。

                  存儲和使用建議

                  正確的儲存條件如下:

                  • 專用存儲設施:

                    利用專門為儲存細胞庫設計的設施,如液氮罐或電冰柜,以防止交叉污染并確保長期生存能力。

                  一致性和質量保證:

                  • 一致的細胞材料:

                    細胞庫系統確保實驗中使用的所有材料都來自一致的來源。
                  • 受控通道數:

                    通過使用在可控傳代次數范圍內的細胞,實驗可變性被最小化。
                  • 適時文化實踐:

                    僅在必要時培養細胞有助于保持細胞系的原始特性,并降低與保持連續培養相關的成本。


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